原核链特异性测序

链特异性转录组是研究有参考基因组物种转录组的一种有效手段。相对于传统转录组测序而言,链特异性转录组可以确定两条链的转录方向,为基因的进一步注释和功能分析提供更准确的信息,同时还可以挖掘转录组中的non-coding RNA信息。原核生物链特异性转录组项目中,可以挖掘新的ncRNA与反义(antisense)转录本;还可以进行基因结构的研究,例如操纵子鉴定,为基因网络调控的研究提供有力支持。

3、技术参数
样本类型 样本量 样本纯度 周期 备注
RNA/菌体 2-4ml (密度约1*107个/ml,对数期或稳定初期) OD260/280=1.9-2.2,RIN值≥7,23S:16S≥1.0,确保RNA无降解染 35-40工作日 样品保存期间切忌反复冻融,送样时请使用冰袋或干冰运输
RNA:4ug
4、案例解读
研究背景:大肠杆菌O157:H7(EHEC)是一种常见的致病菌。本文使用SOLiD和Illumina测序仪通过链特异性RNA-seq方法研究该菌在11种条件下(生物及非生物)的转录情况。
研究结果:对比SOLiD和Illumina测序结果发现:表达差异较大基因的测序结果具有极高的相关性。此外,通过热图分析2026种基因的转录情况,结果发现,在LB条件下上调和下调的基因没有在其它10种条件下形成调控群,该恶劣条件使得转录呈现巨大的差异。
研究结果:分析表明游隼和猎隼约在 210 万年前共享一个祖先,经与鸡、斑胸草雀基因组比较后,发现游隼和猎隼基因组中大片段重复相对较少,还不到基因组的 1%;转座子组成与斑胸草雀最为相似。此外,在鸡和斑胸草雀中存在的嗅觉受体 γ-c 簇基因扩张,在游隼和猎隼并不存在,研究人员认为这有可能与游隼和猎隼依赖于视觉定位猎物有关。一般所有的鸟类基因组中都存在基因损失,但游隼和猎隼的基因丢失要比基因获得严重很多。

          差异表达基因的热图
参考文献
Richard L, Svenja S, Steffen S,et al. Comparison of strand-specific transcriptomes of enterohemorrhagicEscherichia coliO157:H7 EDL933 (EHEC) under eleven different environmental conditions including radish sprouts and cattle feces[J].BMC Genomics, 2014,15.